manipulação de ácidos nucleicos in vitro depende, inicialmente, da disponibilidade de enzimas que possam cortar, ligar e replicar o DNA ou transcrever de forma reversa o RNA. As enzimas de restrição reconhecem uma sequência de bases específicas na dupla hélice do DNA e cortam ambas as fitas da hélice, em lugares determinados, gerando fragmentos específicos, que podem ser facilmente manipulados e que podem conter determinado gene (ZAHA, 2012). Em relação as enzimas de restrição, considere a seguinte sequência 5’ → 3’ de DNA:
5’GAGTAAAGGAGAATTCGAACTGGAGTGTTGTTGAATTAGATGGATCCGATGGGCACAGGAAGCTTGTGATGCAACATACGGAAAAC3’
INDIQUE quantos fragmentos de DNA resultam da digestão com as enzimas abaixo, e em seguida, APONTE o número de pares de bases (pb) de cada fragmento:
a) EcoRI ( G/AATTC):
b) BamHI (G/GATCC):
c) HindIII (A/AGCTT):
d) EcoRI + BamHI + HindIII:
Utilize o gel representado a seguir para desenhar os produtos esperados após a digestão de sua amostra com as enzimas acima. CONSIDERE o marcador informado:
Soluções para a tarefa
Resposta:a) 2 fragmentos com 11 pb e 75 pb
b) 2 fragmentos com 42 pb e 44 pb
c) 2 fragmentos com 60 pb e 26 pb
d) 4 fragmentos com 11 pb, 31 pb, 18 pb e 26 pb
Explicação:
Enzimas de restrição
As endonucleases ou enzimas de restrição são as chamadas de "tesouras moleculares" e cortam fragmentos específicos da fita de DNA por meio do reconhecimento de uma determinada sequência de nucleotídeos, associada a cada tipo de enzima.
Essas enzimas são obtidas de cepas bacterianas e podem ser:
EcoR1: são enzimas obtidas de E. coli que cortam na sequência G'AATTC, sendo sua sequência complementar C/TTAAG.
BamH1: obtidas de B. amyloliquefaciens e cortam na sequência G'GATCC, sendo sua sequência complementar C'CTAGG.
Hind3: obtidas de H. influenzae e cortam na sequência A'AGCTT, sendo sua sequência complementar T'TCGAA.