Question

Analise as afirmativas a seguir sobre técnicas de transformação genética.


I) O método de microinjeção apresenta baixa taxa de sucesso devido à necessidade de treinamento para o operador e sua especificidade em células animais e em tecidos com baixo teor de enzimas de restrição (endonucleases).

II) No método de biobalística são utilizados microprojéteis de metais reativos e de baixa densidade para inserir o gene de interesse no interior das células.

III) No método de Agrobacterium, utiliza-se o mecanismo de indução de tumor das bactérias do gênero Agrobacterium para inserir o gene de interesse em plantas.

IV) A transformação por choque térmico, a qual abre poros na estrutura bacteriana por variação brusca de temperatura, destaca-se devido a sua simplicidade e baixo custo em comparação com outros métodos.

V) O método de eletroporação, o qual forma poros por meio de impulsos elétricos, é vantajoso devido a alta taxa de regeneração de protoplastos, o que evita mutações e contribui para a sobrevivência das células.

Glossário:
Microinjeção: A microinjeção é o processo de transferência de materiais genéticos para uma célula viva usando micropipetas de vidro ou agulhas de microinjeção de metal.

É correto dizer que:

Alternativas

a)Todas as afirmativas são verdadeiras.

b) Todas as afirmativas são falsas.

c) Apenas as afirmativas I, II e IV são verdadeiras.

d) Apenas as afirmativas III, IV e V são verdadeiras.

e) Apenas as afirmativas II e V são falsas.

Answer 1

Considerando as técnicas de transformação genética, podemos afirmar que a alternativa a (afirmativas I, II, III e IV) é a correta.

Técnicas de transformação genética

A técnica de microinjeção consiste em injetar o material genético de interesse no núcleo da célula através de uma micropipeta, sendo utilizado nos casos de fertilização in vitro. Além de ser um procedimento caro devido aos equipamentos especializados, é uma técnica que necessita de profissionais experientes por causa da sua delicadeza, qualquer erro na manipulação das células pode acarretar na sua inviabilidade. O rendimento dessa técnica também é baixo, pois cada transformação deve ser feita manualmente pelo profissional e deve ser realizada em tecidos com baixa presença de enzimas de restrição, para que não ocorra a clivagem ("corte") do material genético inserido.

Para a inserção de material genético na célula com o método de biobalística é utilizado microprojéteis de metais como ouro e tungstênio, que não geram reações de expulsão. Esses microprojéteis são propulsionados por equipamentos especializados que aceleram o objeto em questão em direção às células. É uma técnica utilizada principalmente em células vegetais, já que possuem parede celular rígida.

No método de inserção gênica utilizando Agrobacterium, também utilizado em células vegetais, se submete a célula hospedeira às bactérias para que transfiram o material genético de interesse. as Agrobacterium possuem um plasmídeo indutor de tumor em plantas, que tem alta capacidade de replicação, e é onde o gene de interesse é inserido. As bactérias transformadas (com o plasmídeo recombinante) são expostas às células das plantas e iniciam seu processo de infecção, possibilitando a inserção desse material genético recombinante nos cromossomos da planta.

No choque-térmico, a formação de poros na membrana da célula desencadeada pela exposição a temperaturas muito geladas, seguida de uma incubação rápida a aproximadamente 40ºC e de volta ao gelo. Posteriormente sendo submetida a um meio rico em nutrientes e incubada por longo tempo na temperatura ideal para a célula, de 37ºC. Nesse método não há necessidade de uso de aparelho e nem de reagentes específicos produzidos por empresas especializadas.

Já na eletroporação, onde também são abertos poros na membrana plasmática mas agora por campo elétrico gerado por aparelho especializado. Após transformação da célula, ela também permanece incubada em meio rico em nutriente e a temperatura ideal para recuperação. Essa recuperação pode ocorrer de maneira correta e com taxas altas se o profissional executar a última etapa, de recuperação, de maneira correta, adicionando o meio rico em nutrientes rapidamente após o procedimento.

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