A manipulação de ácidos nucleicos in vitro depende, inicialmente, da disponibilidade de enzimas que possam cortar, ligar e replicar o DNA ou transcrever de forma reversa o RNA. As enzimas de restrição reconhecem uma sequência de bases específicas na dupla hélice do DNA e cortam ambas as fitas da hélice, em lugares determinados, gerando fragmentos específicos, que podem ser facilmente manipulados e que podem conter determinado gene (ZAHA, 2012). Em relação as enzimas de restrição, considere a seguinte sequência 5’ → 3’ de DNA:
0GAGTAAAGGAGAATTCGAACTGGAGTGTTGTTGAATTAGATGGATCCGATGGGCACAGGAAGCTTGTGATGCAACATACGGAAAAC0
INDIQUE quantos fragmentos de DNA resultam da digestão com as enzimas abaixo, e em seguida, APONTE o número de pares de bases (pb) de cada fragmento:
a) EcoRI ( G/AATTC):
b) BamHI (G/GATCC):
c) HindIII (A/AGCTT):
d) EcoRI + BamHI + HindIII:
Utilize o gel representado a seguir para desenhar os produtos esperados após a digestão de sua amostra com as enzimas acima. CONSIDERE o marcador informado:
Anexos:
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Sobre o número de pares de bases (pb) de cada fragmento de DNA:
a) EcoRI (G/AATTC): 2 fragmentos, sendo 11pb + 75pb
b) BamHI (G/GATCC): 2 fragmentos, sendo 42pb + 44pb
c) HindIII (A/AGCTT): 2 fragmentos, sendo 60pb + 26pb
d) EcoRI + BamHI + HindIII: 4 fragmentos, sendo 11pb + 31pb + 18pb + 26pb
Aspectos gerais sobre as bases nitrogenadas e o DNA
- As bases nitrogenadas são definidas como compostos formados por ácidos nucleicos e que são encontrados nas células dos seres vivos;
- Quando estudamos genética, aprendemos que as bases nitrogenadas presentes no DNA são as seguintes:
- citosina;
- guanina;
- adenina e
- timina
A classificação das bases nitrogenadas é feita da seguinte forma:
- Bases púricas: adenina e guanina
- Bases pirimídicas: citosina, timina e uracila.
Em algum processo do DNA, uma base púrica se une a uma base pirimídica e ficam lado a lado desta forma: Adenina - Timina e Citosina - Guanina.
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