Question

Você precisa isolar mitocôndrias de células do fígado de camundongos para estudar a relação retículo endoplasmático e mitocôndria e seu papel no estabelecimento de um quadro de obesidade. Proponha um protocolo de isolamento das mitocôndrias a partir de hepatócitos obtidos de tecidos de camundongos.

Answer 1

Olá!

Para isolar com sucesso mitocôndrias que utilizam este protocolo é fundamental para manter todas as soluções e amostras de tecido em gelo para preservar a viabilidade mitocondrial.

As mitocôndrias irão exibir uma diminuição na atividade funcional, mesmo se mantidas em gelo, ao longo do tempo.

Anestesiados com éter e eutanasiados, expondo o fígado mediante incisão bilateral na cavidade abdominal, com remoção imediata.

• Picotado em pequenos  fragmentos
• Imersos rapidamente em 50 mL de meio contendo sacarose 250 mM,
• Homogeneizadas,
• Centrifugada,
• Sobrenadante resultante.
• Ressuspenso em 10 mL de meio contendo sacarose 250 mM.

Espero ter ajudado.