Question

Quais são os três métodos ultilizados na determinação das proteínas

Answer 1

Métodos para determinação de proteínas
Digestão da matéria orgânica com H2SO4
CuSO4 como catalisador
Método de determinação indireta
Quatro passos para a determinação de proteínas
Método de Kjeldahl
NH3 + H3BO3 -> NH4H2BO3
Baseado na absorção de energia no UV 

220nm ligações peptidicas

280nm triptofano e a tirosina

Lei de Beer A=abc
Absorção no UV
Amostras em solução.

Vantagens: 
Rapido e relativamente sensível.
Não destrói a amostra.

Desvantagens:
Qualquer componente do alimento presente na amostra que absorva no comprimento de onda do UV é um potencial contaminante.

Absorção no UV
Método de Combustão do Nitrogênio 

Desenvolvido por Jean Baptiste Dumas em 1831.

As amostras são queimadas com um fluxo de oxigênio puro e temperaturas elevadas (700-1000°C). 

É um método apropriado para todos os tipos de alimentos.
Método de Dumas
As amostras são pesadas em cápsula de estanho e colocado em um reator de combustão.

O nitrogênio é então quantificado por cromatografia gasosa. 

Método de Dumas
(conc)
Digestão
Proteína + H2SO4 -> (NH ) SO4 + CO2 + SO2 + H2O
4
(aq)
2
N da proteína reduzido e tranformado em sulfato de amônia.
Neutralização/Destilação
(NH4) SO4 + NAOH -> Na2SO4 + 
2
2
2
H2O + NH3 
2
2
Solução de ác. bórico + indicador
Titulação
NH4H2BO3 + HCl -> H3BO3 + NH4Cl 
Conversão do teor de nitrogênio para o teor de proteínas
Fator de conversão 6,25
Método de Biureto
Reativo do Biureto
Cu + Proteína = Complexo quadrado planar 
Ligações peptídicas reagindo com íons cúpricos
Cor violeta 
Proporcional ao teor de proteínas
Aplicações
Soro ou plasma sanguineo
Urina
Saliva
Líquido cérebro espinhal
Vantagens/Desvantagens
Interferência de substâncias Cu
Cores formadas
Rápido, baixo custo e pequena variação de absortividade
Método por Infravermelho
Josué Jandrey
Vicente Ferreira
Bibliografia
Determination of total protein by spectrophotometry: advantagens and disadvantages of proposed methods
Food Analysis Book
sitebiomedico.br.tripod.com/proteinas.htm
Método de Dumas
Vantagens 
Não utiliza produtos químicos perigosos. 

É relativamente rápido, pode ser feito em poucos minutos.

Com equipamentos modernos podemos analisar uma quantidade grande de amostras;

Não gera resíduos tóxicos.

Desvantagens:
Requer equipamentos caros.

Interferência de nitrogênio não proteico.

O método é baseado na absorção de radiação no infravermelho das proteínas.
As amostras para o IR podem ser com o uso de filmes hidratados em filmes secos, dispersão de pó sobre janelas ou pastilhas de KBr. 

Algumas técnicas atuais não utilizam nenhuma preparação da amostra para evitar a desnaturação das proteínas. 
Método por Infravermelho

Vantagens: rapidez na analise, facilidade de operação e preparo da amostra. 

Desvantagens: alto custo do equipamento e a dificuldade na calibração para o seu uso.

Introdução
Proteínas são polímeros de aminoácidos
Alta massa molecular
Variedade de funções
Fontes de aminoácidos essenciais
Qualidade e valor nutricional