O método de Sanger, também denominado Método Didesóxi de Terminação de Cadeia, se baseia no uso de uma enzima para sintetizar cadeias de ácido nucléicos de comprimentos variados. Nesse método, uma fita de ácido nucléico servirá como molde para fita da qual deseja-se descobrir a sequência. Com base nessas informações, IDENTIFIQUE os componentes necessários para uma reação de sequenciamento de Sanger:
Alternativas
Alternativa 1:
Molécula de DNA, desoxinucleotídeos (dNTPs), didesoxinucleotídeos (ddNTPs), iniciador (primer) e RNA polimerase.
Alternativa 2:
Molécula de DNA, desoxinucleotídeos (dNTPs), didesoxinucleotídeos (ddNTPs), iniciador (primer) e DNA polimerase.
Alternativa 3:
Molécula de DNA, enzimas de restrição, didesoxinucleotídeos (ddNTPs), iniciador (primer) e DNA polimerase.
Alternativa 4:
Molécula de DNA, didesoxinucleotídeos (ddNTPs), vetor, transcriptase reversa e DNA polimerase.
Alternativa 5:
Molécula de RNA, desoxinucleotídeos (dNTPs), didesoxinucleotídeos (ddNTPs), primer e sonda fluorescente.
Soluções para a tarefa
Resposta:
Alternativa 2:
Molécula de DNA, desoxinucleotídeos (dNTPs), didesoxinucleotídeos (ddNTPs), iniciador (primer) e DNA polimerase.
Explicação:
Resposta:
Alternativa 2
Explicação:
O método de sequenciamento de Sanger
O método de sequenciamento de DNA mais usado, até os dias de hoje, é o de Sanger. Também chamado de método didesoxi ou método de terminação de cadeia.
Nesse procedimento, uma molécula de DNA cuja sequência deve ser determinada é convertida em fitas simples que são utilizadas como molde para sintetizar uma série de fitas complementares. Cada uma dessas fitas termina aleatoriamente em um nucleotídeo específico diferente. A série resultante de fragmentos de DNA é separada por eletroforese e analisada para revelar a sequência do DNA.
Confira todas as etapas do método de Sanger
Nesse método são preparados quatro tubos de reação de sequenciamento (A, C, G, T), correspondendo a cada um dos quatro nucleotídeos. Cada tubo contém:
O molde de DNA a ser sequenciado;
A sequência do iniciador (primer);
DNA-polimerase;
Os quatro desoxinucleotídeos trifosfatos (dATP, dCTP, dGTP, dTTP);
Um didesoxinucleotídeo trifosfato marcado radiotivamente ou por um corante fluorescente (específico para cada tubo: tubo A tem ddATP, tubo G tem ddGTP, etc.);
O primer ou iniciador marcado é adicionado ao DNA unifilamentar cuja sequência é desconhecida.
A enzima DNA-polimerase adiciona bases livres ao DNA unifilamentar, usando o pareamento de bases complementares.
Ocorrem quatro reações diferentes, correspondendo aos quatro didesoxinucleotídeos marcados (ddATP, ddCTP, ddGTP e ddTTP). Eles terminam a sequência de DNA sempre que são incorporados, ao contrário do desoxinucleotídeo normal (dATP, dCTP, dGTP e dTTP, correspondentes às bases A, C, G e T, respectivamente).
Isso produz fragmentos com comprimentos variáveis, que podem ser separados por eletroforese.
A posição de cada fragmento no gel é indicada pela emissão de partículas radioativas do marcador, o que permite a leitura direta da sequência de DNA.