O método de Sanger, também denominado Método Didesóxi de Terminação de Cadeia, se baseia no uso de uma enzima para sintetizar cadeias de ácido nucléicos de comprimentos variados. Nesse método, uma fita de ácido nucléico servirá como molde para fita da qual deseja-se descobrir a sequência. Com base nessas informações, IDENTIFIQUE os componentes necessários para uma reação de sequenciamento de Sanger: Alternativas Alternativa 1: Molécula de DNA, desoxinucleotídeos (dNTPs), didesoxinucleotídeos (ddNTPs), iniciador (primer) e RNA polimerase. Alternativa 2: Molécula de DNA, desoxinucleotídeos (dNTPs), didesoxinucleotídeos (ddNTPs), iniciador (primer) e DNA polimerase. Alternativa 3: Molécula de DNA, enzimas de restrição, didesoxinucleotídeos (ddNTPs), iniciador (primer) e DNA polimerase. Alternativa 4: Molécula de DNA, didesoxinucleotídeos (ddNTPs), vetor, transcriptase reversa e DNA polimerase. Alternativa 5: Molécula de RNA, desoxinucleotídeos (dNTPs), didesoxinucleotídeos (ddNTPs), primer e sonda fluorescente.
Soluções para a tarefa
Resposta:
Alternativa 3:
Explicação: Molécula de DNA, enzimas de restrição, didesoxinucleotídeos (ddNTPs), iniciador (primer) e DNA polimerase.
A alternativa correta para os ingredientes necessários ao sequenciamento de Sanger é: “Alternativa 2”.
Para saber o porquê dos componentes de uma reação de sequenciamento, é preciso entender sua função no processo.
Quais os reagentes necessário para o sequenciamento de Sanger?
- Molécula de DNA - Essa molécula será o molde para ocorrer todo processo de síntese de novos fragmentos de DNA - que serão posteriormente lidos.
- Primers - São sequências curtas de DNA que indicam onde deve ocorrer a ligação da DNA polimerase e início da cópia.
- desoxinucleotídeos (dNTPs) - são as bases do DNA (A, T, C e G), usados pela DNA polimerase na produção de nova fita de DNA.
- DNA polimerase - Enzima responsável pela cópia da molécula de DNA.
- didesoxinucleotídeos (ddNTPs) - são moléculas marcadas com fluoróforos similares aos dNTPs, contudo, sua incorporação a fita de DNA interrompe a síntese da mesma.
Todos esses 5 reagentes são necessários e suficientes (a adição de outras substâncias à reação pode inibi-la) para formação da reação de sequenciamento de Sanger. Essa mistura dará origem a diversos fragmentos de DNA, cada um terminado com um ddNTPs em uma posição diferente. A leitura e organização desses fragmentos remontará à sequência original da molécula de DNA molde.
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