Na década de 1960, demonstrou-se que a transcrição é regulada por proteínas que se ligam a seqüências específicas doDNA. Em 1983, Dynan e Tjian mostraram que uma proteína de núcleo de células humanas, chamada Sp1, era capaz de seligar a uma destas seqüências e promover transcrição in vitro. Para prosseguir os estudos e determinar o mecanismo deação de Sp1, era necessário obter esta proteína em estado puro. O problema é que Sp1 representa cerca de 0,001% dototal de proteínas celulares. Para purificar a proteína Sp1 pela primeira vez um procedimento adequado seria(Adaptado de W. S. Dynan e R. Tjian. The promoter-specific transcription factor Sp 1 binds to upstream sequences in the SV40 early promoter.Cell. v.35, n. 1, p. 79-87, 1983)(A)cromatografia de afinidade com a seqüência de DNA correspondente.(B) immunoblotting usando anticorpo primário contra Sp1.(C)cromatografia de afinidade usando anticorpo contra Sp1.(D)PCR (polymerase chain reaction).(E)cromatografia de troca iônica.
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A alternativa A) é a correta.
Para purificar a proteína Sp1 pela primeira vez um procedimento adequado seria a cromatografia de afinidade com a seqüência de DNA correspondente.
A purificação de uma proteína é feito com o seu isolamento dos demais tipos, e a melhor forma seria acertando qual é a sequencia de DNA correspondente, e mantendo ela ativa enquanto se destrói as demais.
Atualmente é possível usar a técnica de DNA recombinante, que permitiria a produção em larga escala desse tipo de proteína.
Espero ter ajudado!
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