Em que situações o DNA se multiplica?
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Através de uma PCR (Reação em Cadeia da Polimerase)
A técnica da PCR permite que um fragmento específico da molécula de DNA seja amplificado (aumentado) milhares de vezes em apenas algumas
horas.
Utilizando um aparelho chamado termociclador, a PCR copia as duas fitas da sequencia de DNA desejada, amplificando assim a quantidade de DNA.
Esse processo (PCR) envolve ciclos de variação na temperatura, de forma que por aquecimento as fitas de DNA são separada, e em seguida a temperatura é abaixada para que os Primers se anelem ao DNA por complementariedade de bases.
Então, a temperatura é elevada de novo, para que a enzima Taq, em presença de dNTPs e outros fatores, copie a fita molde (que é o DNA que se deseja amplificar).
Reagentes utilizados na PCR:
Tampão, MgCl2, Primers, dNTP, Taq, H2O, DNA.
- Tampão = faz com que o pH da solução não varie muito.
- Primers = serve para sintetizar a seqüência alvo no sentido 3’- 5’e outro para o sentido inverso isto, 5’-3.’ O "primer" é uma pequena seqüência de nucleotídeos que hibridiza no início da seqüência do DNA que se quer amplificar e da qual ele é complementar.
- dNTP = desorribonuleotídeo trifosfatado, contêm três fosfatos unidos ao grupo hidroxilo 5' da desoxirribosa e dependendo da base nitrogenada serão dATP, dTTP, dCTP ou dGTP (dNTP onde o "N" pode ser A,T,G ou C).
- Taq = A Taq DNA polimerase é proveniente da bactéria termófila, chamada Thermus aquaticus. Polimeriza entre os 70 e os 80ºC.
A técnica da PCR permite que um fragmento específico da molécula de DNA seja amplificado (aumentado) milhares de vezes em apenas algumas
horas.
Utilizando um aparelho chamado termociclador, a PCR copia as duas fitas da sequencia de DNA desejada, amplificando assim a quantidade de DNA.
Esse processo (PCR) envolve ciclos de variação na temperatura, de forma que por aquecimento as fitas de DNA são separada, e em seguida a temperatura é abaixada para que os Primers se anelem ao DNA por complementariedade de bases.
Então, a temperatura é elevada de novo, para que a enzima Taq, em presença de dNTPs e outros fatores, copie a fita molde (que é o DNA que se deseja amplificar).
Reagentes utilizados na PCR:
Tampão, MgCl2, Primers, dNTP, Taq, H2O, DNA.
- Tampão = faz com que o pH da solução não varie muito.
- Primers = serve para sintetizar a seqüência alvo no sentido 3’- 5’e outro para o sentido inverso isto, 5’-3.’ O "primer" é uma pequena seqüência de nucleotídeos que hibridiza no início da seqüência do DNA que se quer amplificar e da qual ele é complementar.
- dNTP = desorribonuleotídeo trifosfatado, contêm três fosfatos unidos ao grupo hidroxilo 5' da desoxirribosa e dependendo da base nitrogenada serão dATP, dTTP, dCTP ou dGTP (dNTP onde o "N" pode ser A,T,G ou C).
- Taq = A Taq DNA polimerase é proveniente da bactéria termófila, chamada Thermus aquaticus. Polimeriza entre os 70 e os 80ºC.
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O DNA controla toda atividade celular ! No processo de duplicação do DNA, as pontes de hidrogênio entre as bases se rompem e as duas cadeias começam a se separar. À medida que as bases vão sendo expostas, nucleotídeos que vagam pelo meio ao redor vão se unindo a elas, sempre respeitando a especificidade de emparelhamento: A com T, T com A, C com G e G com C.
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