Durante uma aula no laboratório de preparação de laminas histológica, Maria coloca xilol em um béquer de vidro, adiciona o material de estudo previamente desidratado e aguarda o tempo do procedimento padrão. Conforme o tecido torna-se transparente, ela proclama em alto e bom som que o xilol não é um mero descolorante e que todos os reagentes utilizados na preparação de uma lâmina contribuirão para a visualização do núcleo e citoplasma no microscópio. De posse dessas informações, elabore um procedimento histológico a partir de modelo animal.
Soluções para a tarefa
Para a preparação de uma lâmina histológica animal, deve-se seguir os passos a seguir:
1 - Coleta e Dissecação : Coletar o material a ser utilizado no preparo da lâmina (órgão, tecido etc) e seccionar caso seja grande demais;
2 - Fixação : mergulhar as partes seccionadas numa solução de fixação, para manter as características celulares intactas. Geralmente utiliza-se soluções de paraformaldeído tamponado.
3 - Processamento (desidratação, diafanização e inclusão em parafina) : Primeiro, deve-se desidratar o material, para retirar toda a água presente em soluções de álcool + água, aumentando sucessivamente a concentração de álcool (30%, 40%, 50% etc), até que a solução final possua 100% álcool.
Em seguida, o material deve ser diafanizado pela ação do Xilol, que irá remover gorduras dos tecidos, tornando o material transparente e irá retirar todo o álcool presente, para a inclusão da parafina.
4 - Emblocamento : a parafina é adicionada no material em moldes, para possibilitar o seccionamento.
5 - Microtomia : após endurecimento dos blocos, é feito o seccionamento dos blocos em 5 a 10 micrômetros de largura.
6 - Coloração : nesta etapa, a parafina é removida com soluções de xilol e o material é rehidratado com soluções álcool-água, diminuindo gradativamente a concentração de álcool até que a solução seja 100% água.
Em seguida, são adicionados os corantes hematoxilina (corante basofílico atraído pelos componentes ácidos como o núcleo) e eosina (corante acidófilo que colore os componentes básicos, como o citoplasma), separadamente. O material então é novamente desidratado com álcool e adicionado mais Xilol para a fixação da coloração.
7 - Montagem: Por fim, são pingados na lâmina resina líquida e adiciona-se a lamínula e as lâminas secam espontaneamente ou em estufa.
Bons estudos!