Considerando que você esteja conversando com o diretor e ele faça as seguintes perguntas abaixo, o que você responderia?
A) Qual metodologia deve ser utilizada para expressar grandes quantidades dessa proteína? Por quê?
B) Qual seria o ponto principal a ser considerado, no que diz respeito ao vetor de expressão, tendo em vista que o seu objetivo é obter uma grande quantidade da proteína X?
C) Descreva, de forma resumida, as principais etapas para a obtenção de grandes quantidades da proteína de interesse, através da metodologia proposta.
Soluções para a tarefa
Resposta:
oi bom dia tudo bem
Explicação:
letra b
Resposta:
A) Devemos utilizar a técnica de DNA recombinante para expressar essa proteína. A técnica deve ser utilizada porque permite transformar células bacterianas como, por exemplo, a E. coli, em fábricas para síntese de proteínas em grandes concentrações.
B) O ponto principal a ser considerado é a construção dos vetores de expressão, tendo em vista que o objetivo é obter uma grande quantidade da proteína X. Dessa forma, seria construído um vetor de expressão contendo um promotor altamente ativo (forte), adjacente ao cDNA, que codifica a proteína, causando, assim, a produção de grandes quantidades anormais de RNA mensageiro.
C) As etapas incluiriam a obtenção do cDNA que codifica a proteína X inteira e a construção do vetor plasmidial contendo o promotor forte adjacente ao cDNA codificando a proteína X clonada. A inserção do cDNA (que codifica a proteína X) no vetor seria realizada pela técnica de clonagem (formando um DNA recombinante). O DNA recombinante seria introduzido em bactérias E. coli. Dessa forma, o cDNA inserido seria transcrito de forma eficiente e traduzido em proteína de interesse. Após a tradução, a proteína poderia ser purificada da célula hospedeira por cromatografia, após a lise das células.
Explicação: