A manipulação de ácidos nucleicos in vitro depende, inicialmente, da disponibilidade de enzimas que possam cortar, ligar e replicar o DNA ou transcrever de forma reversa o RNA. As enzimas de restrição reconhecem uma sequência de bases específicas na dupla hélice do DNA e cortam ambas as fitas da hélice, em lugares determinados, gerando fragmentos específicos, que podem ser facilmente manipulados e que podem conter determinado gene (ZAHA, 2012). Em relação as enzimas de restrição, considere a seguinte sequência 5’ → 3’ de DNA:
5’GAGTAAAGGAGAATTCGAACTGGAGTGTTGTTGAATTAGATGGATCCGATGGGCACAGGAAGCTTGTGATGCAACATACGGAAAAC3’
INDIQUE quantos fragmentos de DNA resultam da digestão com as enzimas abaixo, e em seguida, APONTE o número de pares de bases (pb) de cada fragmento:
a) EcoRI ( G/AATTC):
b) BamHI (G/GATCC):
c) HindIII (A/AGCTT):
d) EcoRI + BamHI + HindIII:
Utilize o gel representado a seguir para desenhar os produtos esperados após a digestão de sua amostra com as enzimas acima. CONSIDERE o marcador informado:
Soluções para a tarefa
Resposta:
a) 1 fragmento 11 pb
1 fragmento 75 pb.
b) 1 fragmento 42 pb.
1 fragmento 44 pb.
c) 1 fragmento 60 pb.
1 fragmento 26 pb.
d) 4 fragmentos:
11 pb / 31 pb/ 18 pb / 26 pb.
Explicação:
A quantidade de fragmentos bem como suas quantidades de pares de bases são:
a) 2 fragmentos, com 11 e 75 pares de bases.
b) 2 fragmentos, com 42 e 44 pares de bases.
c) 2 fragmentos, com 60 e 26 pares de bases.
d) 4 fragmentos, com 11, 31, 18 e 26 pares de bases.
O quadro representando o gel de eletroforese está anexado ao fim da questão!
Como encontrar a quantidade de fragmentos e suas quantidades de pares de base?
- Passo 1. Corte realizado pela EcoRI
Sabendo que a EcoRI corta na sequência "G/AATTC" devemos encontrar essa sequência na fita de DNA. Na fita, temos que o sítio de clivagem está localizado:
5’GAGTAAAGGAGAATTCGAACTGGAGTGTTGTTGAATTAGATGGATCCGATGGGCACAGGAAGCTTGTGATGCAACATACGGAAAAC3’
Após a clivagem:
Fragmento 1: GAGTAAAGGAG---
Fragmento 2: ---AATTCGAACTGGAGTGTTGTTGAATTAGATGGATCCGATGGGCACAGGAAGCTTGTGATGCAACATACGGAAAAC
- Contando os pares de bases, temos:
Fragmento 1: 11 pares de bases
Fragmento 2: 75 pares de bases
- Passo 2. Corte realizado pela BamHI
Seguindo o mesmo raciocínio do passo anterior, temos:
Sítio de clivagem:
5’GAGTAAAGGAGAATTCGAACTGGAGTGTTGTTGAATTAGATGGATCCGATGGGCACAGGAAGCTTGTGATGCAACATACGGAAAAC3’
Após a clivagem:
Fragmento 1: GAGTAAAGGAGAATTCGAACTGGAGTGTTGTTGAATTAGATG---
Fragmento 2: ---GATCCGATGGGCACAGGAAGCTTGTGATGCAACATACGGAAAAC
- Contando os pares de bases:
Fragmento 1: 42 pares de bases
Fragmento 2: 44 pares de bases
- Passo 3. Corte realizado pela HindIII
Seguindo o mesmo raciocínio dos dois passos anteriores, temos:
Sítio de clivagem:
5’GAGTAAAGGAGAATTCGAACTGGAGTGTTGTTGAATTAGATGGATCCGATGGGCACAGGAAGCTTGTGATGCAACATACGGAAAAC3’
Após a clivagem:
Fragmento 1: GAGTAAAGGAGAATTCGAACTGGAGTGTTGTTGAATTAGATGGATCCGATGGGCACAGGA---
Fragmento 2: ---AGCTTGTGATGCAACATACGGAAAAC
Contando os pares de bases:
Fragmento 1: 60 pares de bases
Fragmento 2: 26 pares de bases
- Passo 4. Corte realizado pelas três enzimas
Nesse caso, devemos encontrar os três sítios de clivagem e realizar os respectivos "cortes". Portanto:
Sítios de clivagem:
5’GAGTAAAGGAGAATTCGAACTGGAGTGTTGTTGAATTAGATGGATCCGATGGGCACAGGAAGCTTGTGATGCAACATACGGAAAAC3’
Após a clivagem:
Fragmento 1: GAGTAAAGGAG---
Fragmento 2: ---AATTCGAACTGGAGTGTTGTTGAATTAGATG---
Fragmento 3: ---GATCCGATGGGCACAGGA---
Fragmento 4: ---AGCTTGTGATGCAACATACGGAAAAC
Contando os pares de bases:
Fragmento 1: 11 pares de bases
Fragmento 2: 31 pares de bases
Fragmento 3: 18 pares de bases
Fragmento 4: 26 pares de bases
Saiba mais sobre enzimas de restrição em: brainly.com.br/tarefa/35849344
#SPJ1
