A glicose, principal fonte de energia celular, é transportada na maioria das células por difusão facilitada, por meio de proteínas transportadoras presentes na membrana plasmática. Entre os transportadores de glicose, podemos destacar o GLUT1 (do inglês glucose transporter 1), que facilita o transporte de glicose pela membrana plasmática de células de mamíferos. Vamos supor que você está participando de uma seleção para concorrer a uma bolsa de pesquisa que está vinculada a um projeto que estudará o GLUT1 em ratos com uma doença renal. Esses animais receberão um novo tratamento cujo objetivo é a melhora do transporte de glicose para dentro das células renais. Durante a entrevista, um dos participantes da banca pergunta se você tem conhecimentos de biologia celular e molecular. Você responde que tem algum conhecimento. Então, o entrevistador pede para você falar como faria para avaliar a presença do GLUT1 em amostras de tecido renal de ratos com doença renal, após o tratamento.
Com base nas informações acima, faça um texto resumido abordando os seguintes tópicos:
1) Qual seria a sua resposta diante da pergunta do entrevistador? Descreva qual metodologia você utilizaria para avaliar a presença do GLUT1 em amostras de tecido renal de ratos com doença renal, após o tratamento.
2) Descreva brevemente a técnica escolhida.
Soluções para a tarefa
1) Responderia a pergunta do entrevistador dizendo que a metodologia utilizada para a avaliação da presença do GLUT1 em amostras de tecido renal de ratos com doença renal, após o tratamento é a técnica de avaliação da urina, do jejum e da desproteinização.
2) Essa técnica consiste na avaliação do intervalo de coleta de urina nas gaiolas metabólicas, se de 12h ou 24h; da necessidade de jejum de 12 horas e da necessidade de desproteinização das urinas amostradas.
Bons estudos!
Resposta:
Explicação:
Sendo a amostra de tecido renal e não urina, estas amostras podem ser avaliadas via Western Blotting. A técnica baseia-se na separação das proteínas por peso molecular através de uma eletroforese, seguindo-se da transferência para uma membrana e a detecção da proteína de interesse com um anticorpo específico.
Resumidamente a técnica envolve cinco etapas:
1- extração e quantificação das proteínas
2- eletroforese em gel de poliacrilamida
3- transferência das proteínas para uma membrana
4- incubação da membrana com um anticorpo para detectar a proteína específica a ser analisada
5- revelação dessa membrana para análise dos dados