A eletroforese de gel é uma técnica de separação de partículas carregadas num fluido, sob a influência de um campo elétrico uniforme. Na técnica, utiliza-se um gel de agarose ou poliacrilamida como meio por onde as partículas carregadas migram. Na figura ao lado, está esquematizado um gel destinado a um experimento com proteínas. No esquema, A e B representam terminais que conectam os eletrodos aos polos de uma fonte de tensão (corrente contínua). Abaixo do eletrodo A são mostrados seis poços (regiões), onde são depositadas as amostras a serem analisadas. Com a aplicação do campo elétrico, as proteínas migram no gel de acordo com sua massa em direção ao eletrodo B. No experimento hipotético, uma proteína de interesse (denominada Prot X) foi tratada com solução de dodecilsulfato de sódio (CH3(CH2)11OSO3Na), um composto anfifílico que interage com as proteínas por forças hidrofóbicas. Essa amostra foi depositada no segundo poço. Para interpretação do resultado, uma amostra padrão contendo fragmentos de proteínas de massas conhecidas (chamada de marcador) foi depositada no sexto poço do gel. Seguiu-se a aplicação do campo elétrico e, ao fim do experimento, tanto a proteína de interesse como os fragmentos do marcador migraram no gel até as posições indicadas na figura. Os valores anotados ao lado das bandas dos fragmentos do marcador correspondem às massas dos respectivos fragmentos, em kg.mol-1. a) Para que as proteínas migrem do poço em direção ao eletrodo B, quais devem ser as polaridades da fonte conectada nos terminais A e B? Por quê? b) Calcule a massa (em kg.mol^-1) da proteína de interesse.
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a) O eletrodo A deve ser o polo negativo e o eletrodo B deve ser o polo positivo.
Para que a molécula de dodecilsulfato de sódio possa ser separada, ela deve possuir uma parte polar e outra apolar. Como a proteína funciona como um polo positivo ela irá interagir com a parte apolar (negativa), permitindo que a parte apolar da molécula de dodecilsulfato de sódio, que possui carga negativa, fique livre e acabe sendo atraída pelo polo B que é positivo.
b) DADOS: 4,5 cm -------- 76 kg/mol
6,2 cm -------- 116 kg/mol
6,2 – 4,5 = 1,7 cm
116 – 76 = 40 kg/mol
40 ÷ 1,7 = 23,53 kg/mol cm
Prot X = 5,6 cm na escala
5,6 – 4,5 = 1,1 cm
23,53 . 1,1 = 25,88 kg/mol
76 + 25,88 = 101,88 kg/mol massa aproximada.
Espero ter ajudado!!
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